Autor Principal: Antonieta Lourenia Gomes
Orientador: Prof. Dr. André Belico de Vasconcelos
Data da defesa: 11/11/2014
Resumo:
A capacitação espermática é o processo pelo qual espermatozoides alcançam a habilidade fecundante ao percorrer o trato genital feminino, já que espermatozoides de mamíferos não possuem esta capacidade logo após a ejaculação, mesmo estando móveis e com aparente morfologia normal. Indutores específicos como heparina e cálcio ionóforo são utilizados na indução deste processo fisiológico. Por conseguinte, com o advento das biotecnologias, estudos com a Terapia Fotodinâmica (TFD) tem sido empregadas na obtenção de diversas respostas fisiológicas em células somáticas e germinativas. Desta forma, este trabalho verificou a influência da terapia fotodinâmica e da heparina na indução da reação acrossomal bovina in vitro e a influência dos agentes indutores (TFD e Heparina) com suas respectivas concentrações sobre a produção in vitro de embriões. Foram utilizadas seis doses de sêmen, duas partidas, de um único touro da raça Nelore obtidas na Central de Produção de Sêmen Alta Genetics. Os grupos experimentais forma divididos em dois. Primeiro - Terapia Fotodinâmica (TFD) dispostos em sem tratamento; fotossensibilizador ALA; TFD e TFD + ALA, tendo como tempo de exposição à luz (120 min), potência (10 J/cm2), distancia de exposição à luz (4,0 cm), concentração de 120µm do ALA. Segundo – Heparina dispostos em sem tratamento; 0,05 µl; 0,11 µl; 0,22 µl; 0,44 µl de heparina adicionados em 1 ml de meio FIV. As analises do sêmen após os protocolos de TFD e heparina foram feitas por citometria de fluxo (CF), utilizando como marcador da integridade da membrana plasmática o iodeto de propídio (Ip - 1,5 mM) e a taxa de capacitação pela sonda fluorescente de Fluoróforo Isotiocianato de Fluoresceína/Arachis hypogaea Lectin (PNA-FITC - 1,125 g/ml). Também foram avaliados após o protocolo de fertilização in vitro os índices de índice de clivagem (D3) e conversão embrionária (D7). Para análise estatística foi utilizado o programa Graphpad prism 6.0 cujos dados foram expressos em média e desvio padrão de cinco repetições e os tratamentos foram analisados pelo teste paramétrico one way ANOVA, com pós-teste Bonferroni. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando p < 0,0001. Analisando os grupos após a terapia fotodinâmica, nos espermatozoides reagidos “capacitados”, verificou-se um número muito baixo de células reagidas sem tratamento
(3,7%), quando comparado aos demais tratamentos ALA (27,6%), TFD (39,9%) e ALA+TFD (41,2%). Na avaliação da taxa de clivagem após tratamento com bioestimulador, observou-se significância estatística no grupo sem tratamento (83,8%) quando comparado com os tratamentos ALA (32,3%), TFD (57,3%) e ALA+TFD (42,6%). Na análise de embriões produzidos em D7, houve significância estatística no grupo sem tratamento (21,6%) quando comparado com ALA (2,2%), TFD (9,0%) e ALA+TFD (1,1%). Na análise dos dados após a indução da capacitação por heparina ocorreu uma tendência maior para capacitação no tratamento com 0,11µl, quando comparado aos demais tratamentos; com valor médio de 4,7% de espermatozoides reagidos. Células que não estavam em presença do tratamento apresentaram valor médio de 0,4%, quando comparados com tratamento por heparina nos volumes de 0,22µl (4,2%), 0,44µl (3,8%) e 0,055µl (2,5%). De acordo com análise da taxa de clivagem pôde-se observar que não houve diferenças estatísticas significativas (p>0,0001) entre os tratamentos. Na avaliação da porcentagem de embriões produzidos (D7), observou-se significância estatística (p<0,0001) entre o grupo sem tratamento (44,9%) versus o tratamento com 0,11µl de heparina (37,2%) e nenhuma diferença estatística (p>0,0001) entre os demais tratamentos. Estudos apontam que o tempo de estimulação e o potencial de luz, além da dose dos indutores podem aumentar ou deprimir processos fisiológicos que poderiam induzir modificações nas estruturas biológicas, podendo ocasionar uma lipoperoxidade ou aquecimento de proteínas provocando sua desnaturação. A resposta bioquímica da capacitação também descreve resposta fisiológica pela ação de glicosaminoglicanas, uma vez que estes se ligam as proteínas do plasma seminal bovino (BSP). Concluiu-se que o efeito da terapia fotodinâmica causa alterações sobre os processos da capacitação espermática, sendo necessários ajustes na concentração e tempo de exposição à luz. E que a maior concentração de heparina poderia propiciar uma maior interação com as proteínas BSP, e desta forma potencializar capacitação espermática induzida por estas moléculas.
Palavras Chaves: Terapia Fotodinâmica, Reação Acrossomal, Produção in vitro de Embriões, Heparina
Linha de Pesquisa: Sanidade e Produção Animal nos Trópicos